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2013年02月22日11:39 | 中國(guó)發(fā)展門(mén)戶(hù)網(wǎng) www.chinagate.cn | 給編輯寫(xiě)信 字號(hào)：T|T

附 錄 E

(規(guī)范性附錄)

糞大腸菌群儀器快速檢測(cè)法

E.1　原理

糞大腸菌群儀器快速檢測(cè)法，基于糞大腸菌群能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，分解鄰-硝基苯/酚-β-D-吡喃半乳糖苷(o-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside，ONPG)使培養(yǎng)液呈黃色，通過(guò)光度檢測(cè)及數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換處理，得出單位體積(mL)或質(zhì)量(g)糞便樣品中含有的糞大腸菌群濃度值。

依單位體積(mL)或質(zhì)量(g)糞便樣品中含有的糞大腸菌群濃度值，換算成檢出1CFU糞大腸菌的樣品量，即糞大腸菌菌值。

E.2　設(shè)備與培養(yǎng)基

E.2.1　糞大腸菌群快速檢測(cè)儀

E.2.1.1　儀器技術(shù)性能

儀器技術(shù)性能應(yīng)符合下列要求：

a)進(jìn)樣體積：0.2 mL～5 mL；

b)測(cè)量范圍：100 CFU/100 mL ～1.0×1011 CFU/100 mL；

c)最低檢出限：100 CFU/100 mL；

d)培養(yǎng)溫度：36.5 ℃±0.5 ℃或44.5 ℃±0.5 ℃；

e)檢測(cè)周期：≤12 h。

E.2.1.2　儀器電源

儀器電源要求如下：

依現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際情況分別可選擇220V交流電源與12V直流電瓶電源。

E.2.1.3　糞大腸菌群快速檢測(cè)儀應(yīng)用培養(yǎng)基成分

糞大腸菌群快速檢測(cè)儀應(yīng)用培養(yǎng)基成分如下：

a)蛋白胨：10.0 g；

b)氯化鈉：5.0 g；

c)鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)：0.15 g；

d)N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸鈉鹽(HEPES鈉鹽)：25.0 g(pH調(diào)至7.0±0.1)；

e)乳糖：5.0 g；

f)酵母膏：5.0 g；

g)氯化鎂：0.3 g；

h)蒸餾水：1000 mL。

將上述a)～g)加入h)中溶解，調(diào)pH至7.0±0.1，混勻，分裝至5 mL帶蓋玻璃瓶中，115 ℃±1 ℃，滅菌20 min。儲(chǔ)存于4 ℃暗處備用。

E.2.1.4　生理鹽水稀釋液

生理鹽水稀釋液成分如下：

a)氯化鈉：8.5 g；

b)蒸餾水：1 000 mL。

將成分a)溶解于蒸餾水中，分裝到錐形瓶?jī)?nèi)，121 ℃，20 min 滅菌備用。

E.2.1.5　0.03mol/L磷酸鹽稀釋液

0.03mol/L磷酸鹽稀釋液成分如下：

a)無(wú)水磷酸氫二鈉：2.83 g；

b)磷酸二氫鉀：1.36 g；

c)蒸餾水：1 000 mL。

將成分a)和 b)溶解于少量蒸餾水中，待完全溶解后，加蒸餾水至1 000 mL，121 ℃，20 min 滅菌備用。

E.2.2　其他器材

5 mL、1 mL可調(diào)加樣槍與滅菌槍頭、滅菌采樣瓶、冰箱。

E.3　操作步驟

E.3.1　開(kāi)機(jī)預(yù)熱30min，查看歷史數(shù)據(jù)界面溫度，確認(rèn)溫度使溫度達(dá)到測(cè)量要求并穩(wěn)定。

E.3.2　將樣品混合均勻，用加樣槍取0.2mL待檢樣品，加入到內(nèi)含5mL培養(yǎng)液的檢測(cè)瓶中，混合均勻，記錄編號(hào)并放入對(duì)應(yīng)的檢測(cè)槽中。

E.3.3　關(guān)閉儀器培養(yǎng)區(qū)后，在主界面下按下 “開(kāi)始測(cè)試”鍵，進(jìn)入測(cè)試界面，輸入樣本信息，按下“運(yùn)行”鍵，開(kāi)始檢測(cè)運(yùn)行。

E.3.4　檢測(cè)運(yùn)行時(shí)間一般不超過(guò)12h，儀器將測(cè)試結(jié)果自動(dòng)儲(chǔ)存?zhèn)洳椴⒋蛴≈劣涗浖垘稀?/p>

E.3.5　樣品色度、渾濁度高時(shí)，可用生理鹽水(8.5 g/L)、0.03mol/L磷酸鹽稀釋液、脫氯滅菌自來(lái)水進(jìn)行10倍稀釋。

E.3.6　操作全過(guò)程應(yīng)符合無(wú)菌操作要求。

E

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